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  • 基因槍的使用操作規程

    發布于 2012/03/08閱讀(1729)來源 zxj標簽 基因槍

    摘要

    基因槍的使用操作規程

    內容

    基因槍的使用操作規程

    1。材料準備 在9cm2培養皿上鋪一薄層培養基,把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈傷組織、懸浮細胞、原生質體等)平鋪于培養皿中心,直徑在3cm范圍內。2.金粉的處理取60mg金粉或鎢粉置于離心管中,加入lml無水乙醇,充分振蕩3min,以9615g離心1rain,去上清,再加入...關鍵詞:方法操作基因乙醇離心固定
    1。材料準備
    在9cm2培養皿上鋪一薄層培養基,把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈傷組織、懸浮細胞、原生質體等)平鋪于培養皿中心,直徑在3cm范圍內。
     
    2.金粉的處理
    取60mg金粉或鎢粉置于離心管中,加入lml無水乙醇,充分振蕩3min,以9615g離心1rain,去上清,再加入lml無菌水充分混勻后,以9615g離心,重復上述步驟3次。最后,將金粉懸浮于lml無菌蒸餾水中,置4‘C或室溫下儲存。
     
    3.DNA的處理
    取50tA金粉懸浮液,依次加入5rd的質粒DNA(1.0/lg~1)溶液、50//l 0.1mol/L亞精胺(所用的溶液經無菌消毒),振蕩3rain后,在室溫下放置10min,以9615g離心10s,棄去上清液;加入250~1無水乙醇,振蕩后以9615g離心10s,棄上清液。沉淀重新懸浮于60/1l無水乙醇中,可供5槍(每槍10~1)使用。
     
    4.基因槍的操作
    基因槍的所有操作均在無菌條件下進行,具體步驟如下:
    1)先用70%乙醇對基因槍表面及樣品室進行消毒。同時,用70%乙醇將阻擋網和可裂圓片,微彈載體及其固定器、固定工具浸泡15min后,放在超凈臺上晾干。可裂膜片、固定蓋、微彈載體發射裝置可用70%乙醇進行表面滅菌,吹干。
    2)將微粒載片嵌入固定環中,取DNA及金粉的混合物加于微粒載片中心,干燥lmin左右。
    3)安裝可裂膜于其托座上,順時針擰到氣體加速器上。
    4)將空間環、阻擋網、阻擋網托座、微粒載片及固定環(帶有微粒的面朝下)安裝好,旋緊蓋子,插入搶中。
    5)把樣品放在轟擊室中,關好門。
    6)打開氦氣瓶的總閥,順時針轉氦氣調節閥,使氦壓表指針的示數高于可裂膜壓力200i(=1.379MPa)。
    7)打開基因槍及變壓器開關。
    8)按動真空鍵,待真空度至26—28in Hg(=88.05~94.82kPa)時,迅速按下Hold鍵,接著按住發射鍵,并保持不動,直到激發為止。
    9)按通氣鍵待真空表歸零后,取出樣品。
    10)關機。
    把氦氣瓶的總開關旋緊,打一次空槍,把氦壓表指針歸零后,再逆時針旋轉氦壓表調節閥;關閉基因槍的總開關及變壓器開關。
     

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