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  • 高效液相色譜儀使用中常見(jiàn)的問(wèn)題解析

    發(fā)布于 2012/04/25閱讀(1464)來(lái)源 zxj標(biāo)簽 液相色譜儀

    摘要

    高效液相色譜儀使用中常見(jiàn)的問(wèn)題解析

    內(nèi)容

    高效液相色譜儀使用中常見(jiàn)的問(wèn)題解析
     一、問(wèn):用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移,有時(shí)發(fā)生快速變化,原因何在?如何解決?
    答:關(guān)于漂移問(wèn)題:
    溫度控制不好,解決方法是采用恒溫裝置,保持柱溫恒定
    流動(dòng)相發(fā)生變化,解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等
    柱子未平衡好,需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡
    關(guān)于快速變化問(wèn)題:
       1、流速發(fā)生變化,解決辦法是重新設(shè)定流速,使之保持穩(wěn)定
       2、泵中有氣泡,可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。
       3、流動(dòng)相不合適,解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合
    二、問(wèn):色質(zhì)聯(lián)用中毛細(xì)柱的選擇應(yīng)注意什么問(wèn)題?
    答:1、柱效要高
     2、熱穩(wěn)定性好
     3、化學(xué)惰性強(qiáng)
    具體選擇應(yīng)注意:
       1、柱極性。根據(jù)分析樣品選擇不同極性的柱子進(jìn)行分析
       2、柱子內(nèi)徑。內(nèi)徑大小決定柱容量
       3、液膜厚度。分析樣品溫度一不一樣,對(duì)膜厚有不同要求,溫度高液膜要厚,溫度低液膜要薄
       4、柱長(zhǎng)度。柱越長(zhǎng),柱效越高,分離效果越好,但也存在吸附問(wèn)題,柱子過(guò)長(zhǎng),分析時(shí)間長(zhǎng),因此要根據(jù)樣品考慮柱子長(zhǎng)度
       5、外涂層(柱體)的選擇
       6、另外還有儀器型號(hào)、分析對(duì)象等因素
    三、問(wèn):液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
    答:1、篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。
     2、存在干擾峰,解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子,改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子
     
    四、問(wèn):從那些方面可以簡(jiǎn)單判別毛細(xì)管柱子的熱穩(wěn)定性好壞?
    答:1、分配容量(或容量因子)K,好的柱子在高溫運(yùn)行后,分配容量K不應(yīng)有明顯的下降,否則,說(shuō)明柱子的熱穩(wěn)定性不好。
     2、理論塔板數(shù)n,熱穩(wěn)定性好的柱子經(jīng)受高溫后,理論塔板數(shù)應(yīng)基本保持恒定。
     3、柱子的極性。熱穩(wěn)定性好的柱子,高溫前后極性變化不大,具體表現(xiàn)為保留指數(shù)I值沒(méi)有大的變化。
     4、噪聲。熱穩(wěn)定性好的柱子在高溫下使用后,噪聲不能增加。
     5、柱子的去活層,毛細(xì)管柱子涂固定液前內(nèi)部一般要用去活性試劑去活以增加惰性。質(zhì)量好的毛細(xì)管柱子高溫后,去活層不應(yīng)該變化,表現(xiàn)在對(duì)強(qiáng)極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加。
     
    五、問(wèn):為什么進(jìn)樣器內(nèi)的玻璃襯套會(huì)對(duì)色譜行為造成影響?
    答:進(jìn)樣器內(nèi)的玻璃襯套主要有下列作用:
       1、提供一個(gè)溫度均勻的汽化室,防止局部過(guò)熱。
       2、玻璃的惰性不如不銹鋼好,減少了在汽化期間樣品分解的可能性。
       3、易于拆換清洗 ,以保持清潔的汽化室表面,一些痕量非揮發(fā)性組分會(huì)逐漸積累殘存于汽化室,高溫下會(huì)慢慢分解,使基流增加,噪聲增大,通過(guò)清洗玻璃襯套可以消除這種影響。
       4、可根據(jù)需要選擇管壁厚度及內(nèi)徑適宜的玻璃襯套,以改變汽化室的體積,而不用更換整個(gè)進(jìn)樣加熱塊。從以上幾個(gè)方面可以知道玻璃襯套對(duì)色譜行為造成影響的原因。
    六、問(wèn):毛細(xì)管色譜分流進(jìn)樣時(shí),非線性分流的主要原因是什么?
    答:1、進(jìn)樣器溫度太低,樣品汽化不完全,發(fā)生分級(jí)分流。
     2、進(jìn)樣器溫度太高,某些組分可能發(fā)生熱分解,也有的樣品可能發(fā)生催化分解,或樣品部分地被吸附在進(jìn)樣器內(nèi)表面上。
     3、在分流點(diǎn)以前樣品沒(méi)有混合均勻或混合不充分。
     4、系統(tǒng)的進(jìn)樣墊,柱接頭等地方漏氣。

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