飲料中4-甲基咪唑的檢測方法
2012年2月中旬，美國消費者倡導組織公共利益科學中心（ＣＳＰＩ）公布了一份聲明，其中聲稱，在可樂飲料中發現高含量的化學成分４－甲基咪唑。

４－甲基咪唑是一種存在于焦糖劑中的化學物質。它是在生產焦糖色素時產生的。焦糖色素能使可樂飲料變成棕褐色。在實驗中發現，4-甲基咪唑能導致動物長腫瘤，有可能給人體帶來致癌風險。

世界衛生組織允許在食物中添加含有4-甲基咪唑的焦糖色素，且對于4-甲基咪唑的劑量有所界定，即每千克不能超過200毫克。中華人民共和國標準GB 8817-2001《食品添加劑 焦糖色（亞硫酸銨法、氨法、普通法）》中規定，4-甲基咪唑在液體食品中含量小于0.02%，即每千克液體中4-甲基咪唑含量小于200毫克，與世界衛生組織要求相同。

在標準GB 8817-2001《食品添加劑 焦糖色（亞硫酸銨法、氨法、普通法）》中，要求實驗中所用試劑和儀器設備除特別注明外，均采用分析純試劑、蒸餾水或去離子水及實驗室常用儀器設備。4-甲基咪唑的測定主要采用薄層色譜法來進行檢測。

薄層色譜法具有快速、簡單等特點。但是相比液相或氣相色譜來說，存在定性錯誤的可能性，如果被測物質和標準物質不是同一個物質，而他們的保留時間一致，則會產生定性錯誤。因此，很多地方選擇使用液相色譜來檢測4-甲基咪唑，并出臺了相應的地方標準。下面將根據河北省地方標準DB13/T 1116-2009《焦糖色中的4-甲基咪唑的測定 高效液相色譜法》對檢測方法做介紹。

6分析步驟

6.1 樣品處理 準確稱取3g樣品（精確至0. 001 g)，加15mL水溶解，移入250 mL分液漏斗中，加100 g/L碳酸鈉溶液15 mL，加三氯甲烷一無水乙醇萃取液60 mL，劇烈振搖5 min。靜置分層后，將有機相移入另一分液漏斗中，水相再按同樣方法萃取一次，合并有機相；用100 g/L碳酸鈉溶液洗滌提取液3次，每次30mL。然后將有機相通過無水硫酸鈉濾入旋轉蒸發瓶中，50℃濃縮至近干，取下，以水溶解殘渣并定容至10mL，經0.45μm微孔膜過濾后供HPLC分析。

6. 2測定

6.2.1 HPLC參考條件

分析柱：C18, 4. 6 mm×250 mm粒度5 μm。

流動相：甲醇: 0. 05 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（(pH 3. 5，含0. 1％庚烷磺酸鈉）=5: 95。

波長：210nm。

流速：1. 0 mL/min。

6.2.2標準曲線：分別進標準系列溶液各10 μL，進行HPLC分析，然后以峰面積為縱坐標，以4一甲基咪唑的含量為橫坐標，繪制標準曲線。

6.2.3試樣測定：吸取6. 1處理后的試樣溶液10 μL進行HPLC分析，測定其峰面積，從標準曲線查得測定液中4一甲基咪唑的含量

7結果計算

試樣中4一甲基咪唑的含量按下式計算：

式中：

X一試樣中4一甲基咪唑的含量，單位為毫克每千克（mg/kg) ;

c一由標準曲線上查得進樣液中4一甲基咪唑的量，單位為微克每毫升（μg/mL) ;

V一試樣稀釋液總體積，單位為毫升（mL) ;

m一試樣質量，單位為克（g) ;

計算結果保留兩位有效數字。

在使用液相色譜檢測時，要求必須使用符合中華人民共和國標準GB 6682-2008的一級水。其他各種標準溶液的配置最少需要用到二級水。瑞楓特別提供Direct-Pure EDI與PURIST的組合套裝，可以提供高純水及超純水，滿足全方位的實驗室用水需求。Direct-Pure EDI高純水系統選用Siemens公司的EDI，以自來水為進水，提供穩定優質的高純水，產品達到同類產品先進水平。PURIST系列超純水系統，精致小巧，使用簡便；它以純水為進水，生產超純水。水質超過或達到GB以及ASTM、CAP、CLSI的一級水標準。該組合套裝，可以保證用戶在使用中用水無憂。瑞楓純水系統已通過FCC、CE等多種認證，同時有專業的驗證工程師，提供所需的驗證服務支持，以及通過各種標準所需的3Q認證，有助于協助用戶通過GMP、GLP等體系認證，讓用戶在使用高品質產品的同時，享受到專業周到的服務。

為更好地保護HPLC儀器，一般上樣前需將溶液預先過濾，除掉溶液中顆粒及微生物，防止色譜柱堵塞、損壞泵等情況發生，從而保證儀器的操作性能及延長儀器使用壽命。為此，瑞楓提供PES、PTFE、Nylon、MCE等多種針頭式過濾器，適用于各種有機相及水相的樣品過濾。

    據專家聲稱，雖然４－甲基咪唑有比較大的危害性，但只要它是正規食品添加劑焦糖中的物質，含量在允許的范圍內，那么對人體將不會有太大的損害。按照人們正常消費水平，如果4-甲基咪唑不超出人體每日允許攝入量，則不能得出危害健康的結論。迄今為止，尚未見到食品中4-甲基咪唑導致人體損害的臨床報道。