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  • 安捷倫高效液相色譜柱清洗注意事項

    發布于 2013/11/12閱讀(1872)來源 hj1

    摘要

    安捷倫高效液相色譜柱清洗注意事項

    內容

    安捷倫高效液相色譜柱清洗注意事項

          第一、安捷倫的色譜柱有很多種,所以要分清類型去沖洗。

          第二、作為普通C18柱,尤其是硅膠基質的普通C18柱,對酸堿鹽以及水,都是造成柱子的損壞的流動相構成。水不能過多(除了帶AQ的純水柱,一般各家品牌都有這款防水柱)我個人認為只要超過80%的水的流動相,都會造成C18的壽命縮短。所以做高水相的流動相分析時請注意選合適的柱子。酸對柱子的損傷是不可逆的,一定要控制PH,我個人認為PH在2以下的都要做好費柱子的準備。堿性條件是對于硅膠基質的C18的弱項,一般的硅膠基質的C18堿性條件都不太耐用,但現在也有堿性PH11的柱子,但比較貴。鹽對色譜柱的影響主要是鹽析造成的,而且是致命。

          第三沖洗方法的問題。沖洗方法根據使用的流動相和樣品的不同沖洗方法要加以區分。一般不加酸堿鹽,水相也不高的情況(如甲醇水60:40),無需太過沖洗,沖洗的目的就是為了把樣品的雜質沖出即可。保存流動相保存即可。酸和堿的條件下,原則上是將酸堿沖出色譜柱,保存在甲醇水即可(如60:40比例可根據要使用的流動相,只要水相不高即可)。鹽的條件比較麻煩,處理不好,不僅僅色譜柱出問題而且儀器也比較麻煩。常用的就是高水相流動相甲醇-水(10:90)將鹽沖出(注意壓力),然后用純甲醇沖洗(這一步是恢復高水相對色譜柱的損傷),最后保存在一般的甲醇水體系即可。

          第四點,沖洗的時候注意是壓力,最好是從小流速開始慢慢提升流速到壓力許可的范圍。沖洗的時間,大家都有個誤區就是沖洗時間用分鐘或小時計算是不準確,準確的是流量一般色譜柱的沖洗都要達到10-20倍的柱體積。

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