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  • 薄層色譜法標(biāo)準操作規(guī)程(SOP)

    發(fā)布于 2011/08/09閱讀(1624)來源 zxj標(biāo)簽 薄層色譜

    摘要

    原理: 薄層色譜法,是將適宜的固定相涂布于玻璃板上,成一均勻薄層。等點樣、展開后,與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比,用以進行藥品的鑒別,雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。

    內(nèi)容

    薄層色譜法標(biāo)準操作規(guī)程(SOP) :
    1 儀器與材料
    1.1 玻板:除另有規(guī)定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的規(guī)格,要求光滑,平整、洗凈后的不附水珠,晾干。

    1.2 固定相或載體:最常用的有硅膠G、硅膠GF、硅膠H、硅膠HF254,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒大小,一般要求直徑為10—40μm。薄層涂布,一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者系將固定相直接涂布于玻璃板上,后者系在固定相中加入一定量的粘合劑,一般常用10—15%煅石膏(CaSO4·2H2O在140℃烘4小時),混勻后加水適量使用,或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5—0.7%)適量調(diào)成糊狀,均勻涂布于玻璃板上。也有含一定展開液或緩沖液的薄層。
    1.3 涂布器:應(yīng)能使固定相或載體在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。
    1.4 點樣器:常用具支架的微量注射器或定時毛細管,應(yīng)能使點樣位置正確集中。
    1.5 展開室:應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸,并有嚴密蓋子,除另有規(guī)定外,底部應(yīng)平整光滑,應(yīng)便于觀察。

    2 操作方法
    2.1 薄層板制備:除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的泡后,倒入涂布器中,在玻璃板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布(厚度為0.2—0.3mm),取下涂好薄層的玻璃板,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘。即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。
    2.2 點樣:除另有規(guī)定外,用點樣器點樣于薄層板上,一般為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,點樣直徑為2——4mm,點間距離約為1.5—2.0cm,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
    2.3 展開:展開室如需預(yù)先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封室頂?shù)纳w,使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5—1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封室蓋,等展開至規(guī)定距離(一般為10—15cm),取出薄層板,晾干,按各品種項下的規(guī)定檢測。

    如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量,則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法,除另有規(guī)定外,可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點及使用說明,結(jié)合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多,故應(yīng)在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下,將供試品與對照品在同一塊薄層上展開后掃描,進行比較并計算定量,以減少誤差。各種供試品,只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結(jié)果。

    3 注意事項
    3.1 所用玻璃板應(yīng)洗凈不掛水珠,光滑平整。
    3.2 鋪板要均勻,厚度適宜,并于室溫下晾干后在110℃活化30分鐘,置于 有干燥劑的干燥箱或干燥器中備用。
    3.3 點樣點一般為圓點,不能太大。

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